Multiplexación de IHC para patrones de expresión, coexpresión y relaciones espaciales proteicas

La inmunohistoquímica (IHC) multiplex es un ensayo que utiliza el concepto básico de tinción de un solo antígeno para detectar varios marcadores a la vez. Permite la titulación de peroxidasa, fosfatasa alcalina y otros anticuerpos primarios o secundarios conjugados y se puede hacer usando varios métodos comunes, incluso con protocolos de tinción directa o indirecta.

AUTOR:

Shayna Donoghue | Científica Adjunta, Operaciones In Vitro - IHC

FECHA:

 Abril de 2018

 

La inmunohistoquímica (IHC) multiplex es un ensayo que utiliza el concepto básico de tinción de un solo antígeno para detectar varios marcadores a la vez. Permite la titulación de peroxidasa, fosfatasa alcalina y otros anticuerpos primarios o secundarios conjugados y se puede hacer usando varios métodos comunes, incluso con protocolos de tinción directa o indirecta.

Los investigadores han estado poniendo el foco en la IHS multiplex debido a las diversas ventajas de usar diferentes anticuerpos al mismo tiempo. Nos permite obtener mayores cantidades de datos al mismo tiempo y al mismo tiempo ahorrar las preciadas muestras de tejido. Se pueden obtener datos espaciales de una proteína objetivo en relación con otra, además de en proporción con la arquitectura tisular y los orgánulos cercanos. Se suele utilizar para determinar juegos secundarios de marcadores de inmuno-oncología en tumores, para tener una mirada más profunda sobre lo que ocurre en el entorno tumoral. La IHC multiplex también se convirtió en una solución importante a la hora de determinar la coexpresión de los marcadores en las células.

 

Fig. 1: tinción CD3 (rosa), CD4 (verde) y DAPI (azul) en tumor CT26.
Fig. 1: tinción CD3 (rosa), CD4 (verde) y DAPI (azul) en tumor CT26.

 

La IHC multiplex se puede instrumentar con diversos protocolos, muchos de los cuales se basan en el mismo concepto que los métodos de tinción con un anticuerpo. Uno de los enfoques puede incluir diferentes variaciones de IHC indirecta. Según el diseño del ensayo, la IHC multiplex indirecta se puede lograr con los mismos anticuerpos huéspedes o con anticuerpos huéspedes diferentes con anticuerpos secundarios conjugados con fluorocromo. También se pueden usar anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa de rábano (PHR) o fosfatasa alcalina (FA) para detectar diversos marcadores con cromogenes de diferente color. Como hay diferentes anticuerpos secundarios que se pueden fijar a un anticuerpo primario, la señal se amplifica y permite una mejor visualización de proteínas de baja expresión.

Otro enfoque que se puede utilizar es el método directo. Si bien la detección directa también se puede logar con el mismo huésped o con diferentes anticuerpos huéspedes primarios, ofrece más flexibilidad para el diseño del ensayo. No es necesario completar el proceso de tinción de cada marcador para iniciar el paso siguiente o incorporar varios tipos de técnicas de bloqueo a lo largo del proceso. La detección directa también es flexible en términos de rotulado de proteínas como anticuerpos primarios, ya que los anticuerpos primarios se pueden conjugar con estiquetas de peroxidasa de rábano (PHR) o fosfatasa alcalina (FA).

Fig. 2: tinción de CD3 (rosa), CD4 (verde), CD45 (roja) y DAPI (azul) en tumor CT26.
Fig. 2: tinción de CD3 (rosa), CD4 (verde), CD45 (roja) y DAPI (azul) en tumor CT26.

 

Ahora Covance ofrece pruebas multiplex de hasta cuatro colores con anticuerpos conjugados y trabaja de manera constante para validar nuevas opciones multiplex como la detección de cromogenes. Hemos desarrollado protocolos optimizados para un proceso de tinción consistente en el Bond RXm Autostainer y en el escáner Aperio VERSA para obtener imágenes de alta resolución a partir de los datos. Contacte a Covance para solicitar más información acerca de solicitudes de marcadores especializados para IHC multiplex, además de acerca de nuestros otros servicios de IHC.

 

Nota: Los estudios se realizaron de conformidad con la normativa de bienestar animal vigente en un establecimiento con acreditación de AAALAC