E0771 - Modelo singeneico de cáncer de mama

Con este artículo destacado presentamos datos de nuestros estudios iniciales de crecimiento y eficacia  con el modelo E0771. En los datos presentados aquí podemos ver un panorama general de la respuesta de la línea celular E0771 a agentes de inmuno-oncología y radioterapia para poder diseñar estudios combinados racionales.

AUTOR:

Sumithra Urs, PhD | Científica, desarrollo científico

FECHA:

Junio de 2018


El cáncer de mama triple negativo (TNBC, en inglés) es un subtipo complejo y agresivo de cáncer de mama sin receptores de estrógenos y progesterona ni amplificaciones de HER2, lo que dificulta la orientación terapéutica. En consecuencia, existe una demanda constante de mejores opciones de tratamiento de TNBC. Para ayudar a abordar la necesidad de modelos de TNBC, destacamos el mes pasado el modelo EMT6 y aquí presentamos el modelo E0771, que es otro modelo singeneico de TNBC para usar en inmuno-oncología preclínica. La línea celular E0771 es un adenocarcinoma medular de mama de desarrollo espontáneo de ratones C57BL/6.[1] La variedad parental E0771 produce poca metástasis en relación con el modelo 4T1[2] y tiene mutaciones homocigotas en los genes Trp53 y KRAS.[3]

Con este artículo destacado presentamos datos de nuestros estudios iniciales de crecimiento y eficacia  con el modelo E0771. Los datos presentados aquí ofrecen un panorama general de la respuesta de la línea celular E0771 a agentes de inmuno-oncología y a la terapia de radiación para propiciar el diseño de estudios de combinación racionales.

La cinética de crecimiento tumoral del modelo E0771 se muestra en la figura 1. El tiempo de duplicación medio es ~5-6 días, con un aumento constante del volumen tumoral y sin pérdida de peso aparente relacionada con el tumor. La tasa de crecimiento estable propicia un intervalo terapéutico de tres semanas para evaluar las respuestas antitumorales. Los parámetros de crecimiento de tumores no tratados y los tumores tratados con control de isotipo (Rat IgG2b) son similares (fig. 1).

Fig. 1: cinética de crecimiento de tumores subcutáneos E0771. Gráfico que muestra el control de vehículo en relación con el control de isotipo.
Fig. 1: cinética de crecimiento de tumores subcutáneos E0771. Gráfico que muestra el control de vehículo en relación con el control de isotipo.

Composición de las células inmunes que infiltran el tumor

Se analizó la composición inmune del tumor inicial a través de citometría de flujo, y se muestra en la fig. 2. El perfil inmune del E0771 se estableció a partir de tumores de volúmenes de ~750mm3. Los tumores tienen alta infiltración de células CD45+ (70 %), de las cuales la población de linfocitos T (linfocitos T CD8+ y linfocitos T efectores CD4+) está bien representada (6 % de cada una). La población de Treg fue consistentemente más baja que la población de linfocitos T efectores CD4+ y linfocitos T CD8+. En la población mieloide, los tumores E0771 son singulares entre nuestras líneas de cáncer de mama caracterizadas, debido a su abundancia de M-MDSC y la ausencia casi completa de G-MDSC. Los macrófagos M1 resultaron consistentemente más bajos que los M2 en los tumores analizados. Esta composición sugiere un microentorno inmunosupresor.

Fig. 2: perfil inmune del tumor E0771 que muestra la infiltración de células inmunes.
Fig. 2: perfil inmune del tumor E0771 que muestra la infiltración de células inmunes.

 

Respuestas a los tratamientos

Se evaluó la respuesta a agentes inmuno-modulatorios en ratones con tumores E0771 tratados con anticuerpos de bloqueo del punto de control (anti-mPD-1, anti-mPD-1, anti-mCTLA-4 y anti-mLAG3), anticuerpos coestimulantes (anti-mGITR, anti-mOX40 y anti-mCD137) y radiación focal. Probamos la respuesta antitumoral a los inhibidores del punto de control y a los anticuerpos coestimulantes en los casos en los que la dosis se inició antes de la formación de un tumor palpable (fig. 3). El tratamiento con anti-mPD-1 resultó en la eliminación total del tumor, mientras que las respuestas al anti-mPD-L1 y al anti-mLAG3 fueron significativas en términos de la desaceleración del crecimiento tumoral (TGD) de 12,7 y 7,6 días respectivamente (fig. 3 A). En este sentido, el tratamiento con anticuerpos coestimulantes anti-mGITR, anti-mCD137 y anti-mOX40 obtuvo respuestas sustanciales con más de un 50 % de sobrevivientes sin tumor (TFS) y una TGD > 27 días (fig. 3 B).

archivo
Fig. 3: respuesta de tumores E0771 con estadio desconocido a tratamientos con anticuerpos.
Fig. 3: respuesta de tumores E0771 con estadio desconocido a tratamientos con anticuerpos.

 

Si bien estos resultados indican claramente el nivel de respuesta del E0771 a la inmunoterapia (fig. 5), además enfatiza la importancia de factores como el volumen tumoral al inicio del tratamiento y del régimen de tratamiento sobre los resultados. El microentorno inmunosupresor podría ayudar a explicar la respuesta limitada con la mayoría de los regímenes de inmunoterapia probados. La radiación focal puede ser una modalidad de tratamiento útil para modificar un microentorno inmunosupresor. Por consiguiente, se probaron dosis de radiación focal de 5, 10 y 20 Gy y resultaron bien toleradas con TGD de 5.1, 6 y 10,6 días, respectivamente (fig. 6). Con base en los datos de respuesta a la dosis de radiación inicial, podría recomendarse la radiación focal de 10Gy en terapias de combinación.

Fig. 5: respuesta diferencial de tratamientos con anticuerpos sin especificación de estadio y establecidos.
Fig. 5: respuesta diferencial de tratamientos con anticuerpos sin especificación de estadio y establecidos.
Figura 6 con cuadro de control
Fig. 6: respuesta a la terapia de radiación focal.

 

E0771: un modelo potente de inmuno-oncología preclínica para cáncer de mama

Por lo general, los TNBC son resistentes a la monoterapia con inmunoterapia y se consideran tipos de cáncer inmunológicamente "fríos" debido a su infltración mínima de linfocitos T CD8+ en el tumor y la baja inmunogenicidad debido a la carga mutacional. Dada la infiltración celular inmune moderadamente favorable y su respuesta a la inmunoterapia, el modelo de carcinoma de mama singeneico E0771 ofrece un gran potencial como modelo de inmuno-oncología preclínica. Nuestros datos ofrecen un panorama de los efectos de cada monoterapia y sirven como base de información para el diseño de estrategias de combinación. El tiempo de inicio del tratamiento y el volumen tumoral tienen un papel crítico a la hora de determinar la dinámica del resultado, y son dos factores importantes a tener en cuenta en el diseño de estudios con el modelo E0771.

Comuníquese con Covance para hablar con nuestros científicos acerca de cómo puede utilizar el E0771 o alguno de nuestros otros modelos singeneicos en su próximo estudio de inmuno-oncología.

[1]Sugiura K and Stock, C (1952). Studies in a tumor spectrum. Cancer 5:382-402.

[2]Johnston CN, Smith YE, Cao Y et al., (2015). Functional and molecular characterization of E0771.LMB tumors, a new C57BL/6-mouse-derived model of spontaneously metastatic mammary cancer. Dis. Model Mech, marzo; 8(3):237-51.

[3]Yang Y, Howard HY et al., (2017). Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis. Oncotarget, 9 de mayo; 8(19):30621-30643.


Nota: Los estudios se realizaron de conformidad con la normativa de bienestar animal vigente en un establecimiento con acreditación de AAALAC