C1498: un modelo murino para leucemia mielógena aguda (LMA)

AUTOR:

Dylan Daniel, PhD, Director, Desarrollo Científico

FECHA:

Abril de 2017

La leucemia mielógena aguda (LMA) es un cáncer de los glóbulos blancos mieloides de rápida progresión. Se calcula que en el 2017 habrá 21.380 nuevos casos de LMA y 10.590 fallecidos por esta enfermedad. La LMA aparece por la proliferación excesiva de leucocitos mieloides diferenciados o no diferenciados, inicialmente en la médula ósea. A medida que la enfermedad avanza, los blastocitos LMA aparecen en la sangre y otros órganos linfoides secundarios. Cuando las células de LMA proliferan, suprimen la hematopoyesis normal en la médula ósea y aparecen síntomas como anemia y leucopenia. La LMA está caracterizada por una compleja variedad de subtipos definidos por alteraciones genómicas y perfiles de expresión génica. El tratamiento normalmente incluye quimioterapia intensiva seguida por un trasplante de médula ósea (TMO) alogénico en los pacientes que pueden tolerar estas terapias. Para los pacientes mayores con LMA suelen usarse opciones de tratamiento menos debilitantes, entre ellas inmunoterapia, ya que muchas veces no pueden tolerar una quimoterapia intensiva o TMO.

La C1498 es una línea celular de LMA murina que surgió espontáneamente en un ratón C57BL/6 y crece agresivamente en ratones singeneicos. La línea C1498 de Covance se puede usar con luciferasa y mCherry para monitorear el crecimiento tumoral en todo el cuerpo mediante imagenología por bioluminiscencia (BLI) y cuantificar la carga tumoral en tejidos aislados mediante citometría de flujo, respectivamente. En la implantación intravenosa de C1498-luc-mCherry en ratones C57BL/6 singeneicos se observa un crecimiento progresivo de las células mediante el monitoreo con BLI (imagen 1A) con señales evidentes en los huesos largos (médula ósea) y otros sitios diseminados durante la evolución de la enfermedad (imagen 1B).

Imagen 1A: Cinética de crecimiento de C1498-luc-mCherry en ratones C57BL/6 mediante BLI.
Imagen 1A: Cinética de crecimiento de C1498-luc-mCherry en ratones C57BL/6 mediante BLI.
Imagen 1B: Imágenes de BLI representantivas de carga tumoral del C1498-luc-mCherry en ratones sin tratar.
Imagen 1B: Imágenes de BLI representantivas de carga tumoral del C1498-luc-mCherry en ratones sin tratar.

En cuanto a cinética de supervivencia (morbilidad/mortalidad) (imagen 2A), se observó una supervivencia promedio de aproximadamente 23 días; no obstante, los ratones no presentaron ninguna pérdida de peso durante el transcurso de la evolución de la enfermedad (imagen 2B).

Imagen 2: cinética de supervivencia (A) y cambio en peso corporal (B) de ratones C57BL/6 con LMS C1498-luc-mCherry diseminada.
Imagen 2: cinética de supervivencia (A) y cambio en peso corporal (B) de ratones C57BL/6 con LMS C1498-luc-mCherry diseminada.

 

La carga tumoral macroscópica se evaluó al momento de la necropsia (cuadro 1). Los sitios con mayor prevalencia de tumores macroscópicos fueron el hígado, los ganglios linfáticos, los ovarios y la columna vertebral. Al usar la expresión mCherry en la línea C1498, la carga tumoral en tejidos se puede analizar por citometría de flujo al momento de la necropsia del animal. En la imagen 3 se muestra un esquema de gating representativo para cuantificar células de LMA mCherry+ de ganglios linfátidos. En el día 21, la carga tumoral de LMA como porcentaje de células totales en ganglios linfáticos, ovarios e hígado es bastante grande (cuadro 2).

Cuadro 1: Incidencia de lesiones tumorales macroscópicas en tejidos de ratones con tumores de LMA C1498-Luc-mCherry.
Cuadro 1: Incidencia de lesiones tumorales macroscópicas en tejidos de ratones con tumores de LMA C1498-Luc-mCherry.

Imagen 3: estrategia de gating para citometría de flujo para evaluar células de LMA mCherry+ C1498 en una muestra de ganglio linfático.
Imagen 3: estrategia de gating para citometría de flujo para evaluar células de LMA mCherry+ C1498 en una muestra de ganglio linfático.
Cuadro 2: porcentaje de células de LMA C1498-Luc-mCherry+ en tejidos (n=1).
Cuadro 2: porcentaje de células de LMA C1498-Luc-mCherry+ en tejidos (n=1).

Se están haciendo varios ensayos clínicos de inmunoterapias para LMA, entre ellos más de 15 ensayos con inhibidores de puntos de control anti-PD-1 o anti-PD-L1. Se ha reportado que la línea C1498 expresa bajos niveles de PD-L1 en cultivo celular, pero regula por incremento la expresión PD-L1 in vivo significativamente.1 La expresión de PD-L1 in vivo hace que el modelo sea sensible a un retraso en el crecimiento tumoral por bloqueo de PD-1. Esto está acompañado de un aumento significativo de la infiltración de células T CD4+ y CD8+ T en el hígado enfermo con LMA. Estos datos publicados sugieren que el C1498-luc-mCherry sería un modelo ideal para probar combinaciones de inmunoterapia con inhibidores de puntos de control.

Póngase en contacto con Covance para hablar con uno de nuestros científicos y ver cómo puede usar el modelo C1498-luc-mCherry o uno de nuestros otros modelos singeneicos para su próximo estudio de inmuno-oncología.

1Zhang, T. F. Gajewski y J. Kline, Blood, (2009).


Nota: Los estudios se realizaron de conformidad con la normativa de bienestar animal vigente en un establecimiento con acreditación de AAALAC