Oncología in vitro

Acceda a un conjunto completo de ensayos de biología molecular y celular para cubrir la necesidad invaluable de análisis para el objetivo y actividad farmacológica antes de, durante y después del experimento in vivo. Tenemos pruebas ya listas y ensayos personalizados. También puede trabajar junto con el equipo de citometría de flujo, que ofrece perfiles inmunológicos de básicos a integrales usando paneles de inmunotipificación estándar, fosfoflujo, ensayos funcionales y paneles de anticuerpos a medida.

Análisis de expresión proteica

ELISA
Curva estándar de IL-6 humana

 

Tenemos un lector de placas Synergy 2 con un PMT con corrimiento al rojo, un lector de placas Cytation 3 con monocromadores que puede medir una amplia variedad de longitudes de onda, y un lavador de microplacas 405LS para reducir el lavado incompleto o irregular. Tenemos amplia experiencia usando técnicas ELISA de varios proveedores y con varios tipos de muestras como células cultivadas, sangre entera, tejidos frescos y tejidos congelados. Los kits ELISA basados en absorbancia o basados en fluorescencia se pueden usar para producir una curva estándar y medir con exactitud la cantidad de una proteína específica en sus muestras. Para obtener los resultados más precisos, sistemáticamente generamos curvas estándar a partir de estándares proteicos en duplicados o triplicados y cuantificamos su proteína de interés en cada muestra a partir de pocillos triplicados.

ELISpot / FluoroSpot
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Our in vitro services now offers the sandwich enzyme-linked immunospot (ELISpot or FluoroSpot) assay to measure the frequency of cytokine secreting cells in cell suspensions.  This assay allows the secreted cytokine to bind to the coated antibody resulting in a single spot. The CTL S6 Universal analyzer is used to capture quality images and analyze the spots.  Equipped with four optical filters, the CTL analyzer is capable of detecting up to three analytes simultaneously using either colorimetric or fluorometric readouts.  ELISpot or FluoroSpot kits are compatible with blood, lymphoid, and solid tissue.  The samples are routinely performed in duplicate or triplicate to obtain an average to quantify the amount of spots in each sample.

Western blot
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En colaboración con nuestros clientes hemos realizado muchos Western blots exitosos contra una gran cantidad objetivos relevantes para oncología. El personal cuenta con amplia experiencia haciendo Western blots a partir de varios tipos de muestras como células cultivadas, tejidos frescos y tejidos congelados. Con el sistema de imagenología Typhoon, se pueden detectar anticuerpos secundarios quimioluminiscentes, quimiofluorescentes y fluorescentes, lo que permite la identificación de varias proteínas de interés a la vez. También tenemos la capacidad de cuantificar las bandas en una membrana con el software ImageQuant para determinar el tamaño e intensidad relativa de cada banda para cada muestra.

Citometría de flujo
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Tenemos dos citómetros de flujo Attune NxT con cuatro láseres capaces de detectar compuestos fluorescentes en 14 canales. Ya sea que necesite examinar la abundancia de una proteína específica o varias proteínas en la superficie o dentro de las células, nuestros expertos en citometría de flujo junto con el Attune NxT pueden hacerlo posible. Monitoree la abundancia o localización hacia/desde la membrana plasmática de una proteína específica durante un período con tratamiento o compare los niveles de una proteína en distintas líneas celulares o cepas de ratones. Combine la detección de una proteína específica con cualquiera de nuestros otros ensayos de proceso celular con citometría de flujo, (abajo) como el ensayo de apoptosis, ciclo celular o viabilidad celular para determinar si la abundancia de la proteína cambia en distintas etapas de un proceso celular. Hemos detectado con éxito cientos de proteínas diferentes en muestras como células cultivadas, sangre, tejidos y órganos. En sangre, hemos detectado con éxito proteínas usando un ensayo sin lavado y sin lisado que reduce la cantidad de manipulación y permite el análisis de volúmenes muy pequeños de sangre. Vea más información sobre nuestros servicios de citometría de flujo.

Matriz citométrica de microesferas
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También tenemos un sistema Luminex® 100™. Este sistema es un analizador flexible basado en los principios de la citometría de flujo. El sistema le permite multiplexar (medir simultáneamente) hasta 100 analitos en un mismo pocillo de microplaca, usando muestras de tamaño muy pequeño. El sistema genera resultados de bioensayos rápidos y rentables en muchos formatos de ensayo, incluso ensayos de ácido nucleico, ensayos de receptor-ligando, inmunoensayos y ensayos encimáticos. Tenemos placas comerciales, prefabricadas y multiplexadas disponibles para medir los componentes de vías de señalización celular completas o citocinas como la vía AKT, apoptosis, quimiocinas, citocinas, citocinas inflamatorias, factores de crecimiento y las vías TH1/TH2.

Inmunohistoquímica
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Analice sus muestras de tejidos con tinción IHC para detectar células anormales como aquellas que se encuentran en los tumores cancerosos. Hay marcadores moleculares específicos que son característicos de eventos celulares particulares como proliferación o muerte celular (apoptosis). La IHC también se usa muchísimo en investigación básica para comprender la distribución y localización de biomarcadores y proteínas diferencialmente expresadas en diferentes partes de un tejido biológico. Ofrecemos una completa variedad de servicios de histología e IHC internos, con proyectos a medida, y todo el tiempo estamos agregando nuevos marcadores. Nuestros servicios incluyen:

  • Paneles: cáncer, inmuno-oncología
  • Tejido normal, tumor, xenoinjertos, línea celular, validación, inmunofluorescencia, inmunocitoquímica, Multiplex

Inmunohistoquímica y marcadores validados

Microscopía de fluorescencia
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Tenemos un microscopio de fluorescencia invertido Olympus CKX53F para ver proteínas/compuestos fluorescentes en células vivas y un lector de imágenes multimodal BioTek Cytation 3 para ver proteínas/compuestos fluorescentes en células vivas o fijas. Con el uso de microscopía de fluorescencia en células vivas podemos determinar rápidamente el porcentaje de células que contienen un compuesto o proteína fluorescente sin manipular las células. Con células fijas, podemos determinar la localización celular de proteínas específicas dentro de las células después de teñirlas con anticuerpos con etiquetado fluorescente y usando tintes fluorescentes como DAPI, FM 1-43, calceína o DiOC6 para definir compartimentos específicos dentro de una célula.


Análisis de expresión de ADN/ARN

PCR en tiempo real
gráfico de amplificación

Usamos un sistema PCR en tiempo real StepOnePlus™ que puede leer cuatro colores diferentes en una placa de 96 pocillos y se puede usar en ensayos como genotipificación de SNP, análisis de expresión génica, expresión de microARN, análisis de translocación y detección génica. Nuestros especialistas en PCR le ayudan a determinar la expresión de genes específicos en células cultivadas, tejidos frescos o tejidos congelados. Si necesita medir la expresión de genes en diferentes líneas celulares, cepas de ratones, tejidos o tumores, o monitorear la expresión de diferentes genes con diferentes tratamientos, nuestros especialistas en PCR pueden ayudarle a diseñar un estudio que se adapte a sus necesidades.

Perfilado STR de línea celular

La inestabilidad genética de algunas líneas celulares puede provocar cambios a nivel de ADN que pueden poner en riesgo los resultados de la investigación. La autenticación de línea celular a través de un análisis STR (repeticiones cortas en tándem) garantizará que la investigación se esté realizando en las células correctas, maximizando los resultados confiables, y respaldando el trabajo de publicación, y reduciendo el riesgo de perder tiempo y recursos. Compare los resultados de STR con los de fuentes publicadas para autenticar sus líneas celulares. El perfil STR de nuevas líneas celulares se debe establecer para que el perfil STR de pasajes futuros se pueda comparar y se pueda monitorear la estabilidad del ADN. Colaboramos con un laboratorio asociado que se especializa en técnicas y análisis de perfiles STR.

Perfilado de expresión génica en líneas celulares y tumores

El perfilado de expresión génica es la medición de la actividad (la expresión) de miles de genes a la vez para crear una imagen global de la función celular. El ARN se secuencia usando secuenciamiento de nueva generación, se cuantifica y se alínea con miles de secuencias de ARN conocidas de genes específicos. Estos perfiles pueden, por ejemplo, distinguir entre células que se están dividiendo activamente, mostrar cómo las células reaccionan a un tratamiento particular o determinar qué genes se expresan diferencialmente en diferentes líneas celulares, cepas de ratones, tejidos o tumores. Covance colabora con un laboratorio asociado que se especializa en secuenciar el ARN. Una vez que obtenemos la información de secuenciamiento, tenemos el software para cuantificar, alinear y analizar los datos. Podemos comparar la expresión de genes individuales, conjuntos de genes relacionados, grupos de genes específicos de una vía o un proceso, y genomas enteros entre muestras y mostrar los resultados comparativos en gráficos y cifras puntuales.


Procesos celulares

Apoptosis vía citometría de flujo
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La apoptosis es un proceso fisiológico normal, el programa para este proceso está caracterizado por ciertas características morfológicas, incluso pérdida de membrana plasmática, asimetría y adhesión, condensación del citoplasma y núcleo, y clivaje internucleosomal del ADN. La tinción con anexina V FITC precede la pérdida de la integridad de la membrana que acompaña las últimas etapas de muerte celular como resultado de procesos apoptóticos o necróticos. Por lo tanto, la tinción con anexina V FITC normalmente se usa junto con un tinte vital como ioduro de propidio (IP) para identificar las células apoptópicas tempranas (IP negativo, anexina V FITC positivo). Las células viables con membranas intactas excluyen el IP, mientras que las membranas de células muertas y dañadas son permeables al IP. Permítanos determinar si el tratamiento con su compuesto incluye apoptosis en sus muestras y recibir datos sobre el porcentaje de células en cada muestra que están vivas, apoptóticas y muertas. Nuestro equipo de citometría de flujo puede hacer ensayos de apoptosis en varios tipos de muestras como células cultivadas, sangre o tejidos y, si lo desea, analizar subconjuntos específicos de células dentro de cada muestra.

Ciclo celular vía citometría de flujo
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Al teñir el ADN de una célula con un agente aglutinante de ADN fluorescente, como ioduro de propidio (IP), la cantidad relativa de ADN en la célula se puede medir vía citometría de flujo y, por lo tanto, se puede elucidar la etapa del ciclo celular. Durante G0 o G1, una célula contiene 46 cromátides; durante la fase S los cromosomas se duplican y, para el final dela fase S, G2, o fase M, hay 92 cromátides. Los efectos de los inhibidores de punto de control del ciclo celular se pueden confirmar usando este método. Nuestros expertos en citometría de flujo pueden confirmar los efectos de los inhibidores de punto de control del ciclo celular con el método mencionado arriba, así como también determinar el porcentaje de células en diferentes etapas del ciclo celular en muestras como células cultivadas, sangre y tejidos.

Viabilidad y proliferación de células vía citometría de flujo
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Una actividad de esterasa intracelular ubicua y una membrana plasmática intacta son características distintivas de las células vivas. Se realiza rutinarimente un ensayo de viabilidad simple usando un tinte fluorescente que reacciona a aminas y no permeable a células vivas, pero permeable a las células con membranas comprometidas. Por lo tanto, se puede usar para evaluar estados de células mamíferas vivas vs. muertas vía citometría de flujo. Estos ensayos son más sensibles que la exclusión con azul de tripano, un método comúnmente usado para discriminación de células vivas/muertas. Monitoree la viabilidad de células en sus muestras con el paso del tiempo con tratamiento o procedimientos dispares. Combine el ensayo de viabilidad celular con otros ensayos de citometría de flujo como el ensayo de ciclo celular o análisis de abundancia de una proteína específica para excluir el análisis de células muertas. El equipo de citometría de flujo también tiene experiencia en medir la proliferación de células T en reacciones de linfocitos mixtos usando tinción CFSE.

Señalización intracelular vía citometría de fosfoflujo
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También ofrecemos citometría de fosfoflujo, que es una herramienta valiosa para evaluar nuevos fármacos y ver sus efectos en la activación de vías de señalización celular in vitro; así como también la capacidad de medir efectos farmacológiocs  in vivo multiplexando la técnica con marcadores de superficie de inmunotipificación para distinguir el análisis en diferentes subconjuntos celulares. Esta plataforma usa anticuerpos con etiquetado fluorescente que reconocen proteínas solo cuando están fosforiladas en residuos de aminoácidos específicos que regulan su función. Los datos de fosfoflujo son altamente consistentes y reproducibles, lo que a su vez crea una plataforma única para analizar la señalización celular.  Para ver más información lea nuestra publicación del blog relacionada con este tema: "Citometría de fosfoflujo para la evaluación de eventos de señalización intracelular en células cancerosas y células inmunes"vea nuestro seminario virtual sobre este tema.


Procesamiento de células y tejidos

Separación celular

La separación celular usando citometría de flujo es un tipo especializado de citometría de flujo. Es un método para separar una mezcla heterogénea de células biológicas en dos o más recientes, una célula por vez, en base a las características fluorescentes y de dispersión de luz de cada célula. Con la separación de células se puede separar células vivas en base a cualquier señal de dispersión, fluorescente o una combinación de ambas. Tenemos experiencia separando células vivas vs. muertas, células que expresan una proteína fluorescente específica o células que expresan un marcador de superficie específico o un conjunto de marcadores de superficie. Después de la separación, las células se pueden cultivar y/o usar en cualquier ensayo más adelante.  También hemos creado con éxito varios clones de una célula que expresan distintos niveles de proteínas específicas a partir de varias líneas celulares. Colaboramos con un laboratorio asociado que tiene varios citómetros de flujo para separar células y años de experiencia separando células de distintas maneras.

Procesamiento de tejidos a células viables automatizado
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Covance puede disociar tejidos en suspensiones unicelulares al combinar disociación mecánica con degradación enzimática de la matriz extracelular, lo que mantiene la integridad estructural de los tejidos. El kit de disociación Miltenyi Biotech en conjunto con el octodisociador gentleMACS™ produce una generación rápida y eficaz de suspensiones unicelulares a partir de xenoinjertos o tejidos tumorales de humanos o ratones. Este ensayo se ha optimizado para un alto rendimiento de células tumorales y linfocitos infiltrantes de tumor LIT (LIT) preservando los epítopos de la superficie de la célula. Las células disociadas después se pueden cultivar, teñir para marcadores de proteínas internos/externos, aislar usando separación celular o usar en muchos otros ensayos más adelante. Además de tejidos tumorales, los expertos en citometría de flujo tienen muchos años de experiencia disociando muchos tejidos diferentes como bazos, glándulas linfáticas, pulmones y piel.

Procesamiento de tejidos a proteínas u homogenatos de ADN/ARN automatizado

Covance puede ofrece homogenatos de proteína que contienen un batería de inhibidores de proteasas y fosfatasas u homogenatos de ADN/ARN en TRIzol® o RNAlater®. Tenemos un homogeneizador de microtubos BeadBlaster™ 24 que alisa, tritura y homogeneiza completamente una amplia variedad de muestras biológicas desde tejido blando a hueso. Hasta las muestras más difíciles y resistente se homogeneizan completamente. El portatubos de acero inoxidable somete hasta 24 muestras a un movimiento 3D de alta velocidad optimizado que produce impactos de alta energía entre las muestras y microesferas para liberar el contenido celular. Después de la homogeneización, las muestras se pueden centrifugar y el sobrenadante se colecta para seguir procesándose.


Cultivo de células

Cultivo a gran escala
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Covance puede cultivar y ampliar sus líneas celulares para implantarlas en cientos de ratones o congelar tantos tubos como sea necesario con las concentraciones celulares que necesite. Tenemos catorce incubadoras de CO2, tres cabinas de bioseguridad de tamaño completo, dos contadores de células automatizados y una gran experiencia en el cultivo de cientos de líneas en placas, matraces, botellas de cultivo rotatorias, matraces de agitación y matraces de varias capas.

Morfología celular
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Covance puede monitorear la morfología celular de sus células en cultivo usando un microscopio de fluorescencia invertido Olympus CKX53F con contraste de fases y una cámara CCD de 1,4 MP. Vea imágenes de sus células antes de, durante y después del tratamiento, durante períodos extendidos, o en momentos específicos antes de la implantación para verificar que las células estén creciendo normalmente.

Tumorigenicidad/crecimiento celular
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Podemos monitorear el crecimiento de sus células en el tiempo y comparar distintas variantes de células, células cultivadas en distintos medios o células cultivadas con distintos tratamientos. Tenemos dos contadores de células automatizados Luna que pueden distinguir con precisión las células vivas de las muertas y hacer el recuento de cada población. Nuestro equipo de cultivo celular tiene amplia experiencia en el cultivo de varios tipos de células, incluso células tumorales, células primarias y neuroesferas. El equipo también tiene experiencia en la ejecución de ensayos de formación de colonias para detectar el potencial tumorigénico de las células transformadas y los efectos de supresión tumoral de proteínas en células transformadas in vitro. Nuestro equipo de citometría de flujo tiene experiencia en el monitoreo de la proliferación de células T estimuladas o células T en reacciones de linfocitos mixtos usando tinción CFSE.

Análisis de imágenes de alto contenido
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Covance tiene la capacidad de teñir células y capturar imágenes fluorescentes usando el lector de placas Cytation 3. Una vez capturadas las imágenes, tenemos un software especializado que puede contar los núcleos, contar células vivas versus muertas, contar células teñidas como positivo versus negativo y medir el tamaño, la circularidad, el área, el perímetro y la intensidad de cada color en las imágenes.

Generación de línea celulares por imágenes
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La luciferasa de las luciérnagas (P. pyralis) es una enzima que produce bioluminiscencia en la presencia de D-luciferina. El ADN para el gen de luciferasa 2 (luc2), junto con un gen de resistencia a la puromicina, se incorpora al genoma de las células usando un sistema de transducción lentiviral. Mientras se cultivan las células, se agrega puromicina al medio para seleccionar solo las células con el gen de luciferasa insertado. Once the luc-enabled cells are injected into a mouse or rat and D-luciferin is administered, the light produced can be detected with Covance's IVIS® Spectrum in vivo imaging system. El equipo de servicio in vitro tiene experiencia en la ejecución de cada paso del proceso desde la transducción estable de células, la selección de las células transducidas y hasta la medición de la emisión de luz de las células.

Read our related blog article regarding luciferase

Ensayo de citotoxicidad/proliferación
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Los ensayos de citotoxicidad/proliferación se usan muchísimo para evaluar la citotoxicidad en bibliotecas de compuestos. Si está interesado en desarrollar un agente terapéutico que ataque células de cáncer que se dividen rápidamente, podemos probar sus compuestos citotóxicos. También podemos cribar "coincidencias" de cribados iniciales de alto rendimiento para detectar efectos citotóxicos no deseados antes de que invierta en su agente como compuesto farmacéutico. MI Bioresearch cuenta con más de 400 líneas celulares disponibles y puede medir la toxicidad de su compuesto en la línea que usted escoja. Proporcionamos gráficos y valores IC50 para cada línea celular y compuesto.


Análisis de sangre y plasma

Hemogramas completos

Trabajamos con un laboratorio que se especializa en la determinación de la cantidad de cada componente principal en muestras de sangre de su estudio usando un hemograma o conteo sanguíneo completo (CSC).

Una prueba de hemograma completo mide varios componentes y características de la sangre, como:

  • Glóbulos rojos

  • Glóbulos blancos

  • Hemoglobina

  • Hematocrito

  • Plaquetas

  • Volumen corpuscular medio

  • Hemoglobina corpuscular media

  • Concentración de hemoglobina corpuscular media

Los aumentos o descensos anormales en el recuento celular que se pueden ver con un hemograma completo indican que el animal tiene una afección médica subyacente.

Química sanguínea

Las pruebas o paneles de química sanguínea son grupos de análisis que miden muchas sustancias químicas en la sangre que son liberadas de tejidos corporales o producidas durante la descomposición (metabolismo) de ciertas sustancias. Un análisis de química sanguínea ofrece información sobre la salud general de un animal, ayuda a buscar ciertos problemas e indica si un tratamiento para un problema específico está funcionando. Colaboramos con un laboratorio asociado que se especializa en el análisis de sangre para componentes individuales o perfiles de componentes como el perfil químico completo que incluye:

  • Albúmina
  • Fosfatasa alcalina
  • Alanina aminotransferasa
  • Aspartato aminotransferasa
  • Urea en sangre
  • Calcio
  • Colesterol
  • Albúmina
  • Fosfatasa alcalina
  • Alanina aminotransferasa
  • Aspartato aminotransferasa
  • Urea en sangre
  • Calcio
  • Colesterol
Farmacocinética

La farmacocinética, a veces abreviada como PK, es una rama de la farmacología dedicada a determinar el destino de sustancias administradas externamente a un organismo vivo. Las sustancias de interés incluyen agentes farmacéuticos, hormonas, nutrientes y toxinas. El objetivo es descubrir el destino de una sustancia desde el momento en que se administra hasta el punto que se elimina completamente del cuerpo. La farmacocinética describe cómo el cuerpo afecta a una sustancia específica tras la administración a través de los mecanismos de absorción y distribución, así como también los cambios químicos de la sustancia en el cuerpo (por ej., por enzimas metabólicas como las enzimas citocromo P450 o glucuroniltransferasa), y los efectos y rutas de excreción de los metabolitos de la sustancia. Las propiedades farmacocinéticas de las sustancias pueden verse afectadas por elementos tales como el sitio de administración y la dosis de sustancia administrada. Estos pueden afectar la tasa de absorción de la sustancia. Colaboramos con un laboratorio asociado que se especializa en la detección de su agente en tejidos específicos.


Aspectos destacados de los equipos in vitro

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Attune™ NxT

Citómetro de flujo de enfoque acústico, 4 láseres, 16 parámetros
Precision_Imagen0202_2016_1024-1

Precision™

Procesador de muestras en microplacas y sistema de pipetas
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También contamos con otras técnicas estándar. Además desarrollamos ensayos a medida para cubrir las necesidades particulares de nuestros clientes.

Typhoon 9410

Sistema de imagenología con módulo de láser azul
Synergy2_Imagen0207_2016_1024-1

Synergy 2

Lector de placas multimodal
Cytation-3_Imagen_0171

Cytation™ 3

Sistema de imagenología de alto contenido
Luminex-100-e1477685412966

 

 

También contamos con otras técnicas estándar. Además desarrollamos ensayos a medida para cubrir las necesidades particulares de nuestros clientes.

Sistema Luminex® 100™

Sistema de multiplexación de analitos
Microscopio_Imagen0209_2016_1024-1

CKX53F

Microscopio de fluorescencia invertido con cámara CCD de 1,4 MP
StepPlusOne_Imagen0204_2016_1024-1

StepOnePlus™

Sistema PCR en tiempo real
Refrigerador de cultivo de células

 

 

 

Producción de cultivo de células a gran escala

Centro de producción con 14 incubadoras y tres cabinas de bioseguridad

 

También contamos con otras técnicas estándar. Además desarrollamos ensayos a medida para cubrir las necesidades particulares de nuestros clientes.